Skip to content

pawlukiewicz rzeszów

2 miesiące ago

655 words

Warto zauważyć, że traktowanie WY14643 konsekwentnie prowadziło do 2-krotnego zwiększenia aktywności reportera lucyferazy. Zakres aktywacji reportera lucyferazy w tych warunkach może być spowodowany obecnością surowicy w doświadczalnym projekcie. Analiza myszy. Do analizy HFD, 3-miesięczne samce myszy Pml-WT i -KO 129Sv losowo przydzielono do grup eksperymentalnych i poddano diecie kontrolnej (TD.08806, Harlan Teklad) lub HFD (TD.06414; Harlan Teklad; ). Myszy monitorowano przez 20 tygodni, a następnie poddano analizie masy ciała za pomocą EchoMRI, testu tolerancji glukozy (GTT) oraz analizy spożycia i aktywności pokarmowej (mierzonej w komorach metabolicznych). W celu pobrania tkanki i surowicy myszy pozbawiono pokarmu przez 6. 8 godzin w ciągu dnia (od 9 rano do 3. 5 po południu) w celu uniknięcia skutków spowodowanych natychmiastowym przyjmowaniem pokarmu. Lepeptę w surowicy mierzono za pomocą testu ELISA (Mouse Leptin ELISA Kit, Crystal Chem Inc.). W przypadku GTT myszy były głodzone od 8 rano do 4 po południu i umieszczane w klatkach do przechowywania drewna; następnie wstrzykiwano glukozę w ilości 2 g / kg i mierzono dynamikę glukozy we krwi za pomocą gliko-metrometru z żyły ogonowej. W celu analizy myszy LepOb, podwójnie zmutowane myszy Pml-LepOb odstawiono od piersi w 4 tygodniu życia, genotypowano i monitorowano pod względem masy ciała i składu masy ciała we wskazanych punktach czasowych. Próbki pacjentów i IHC. Charakterystykę guza i pacjenta, budowę mikromacierzy tkankowej i profile ekspresji genów opisano poprzednio (53, 79, 80). Detekcję IHC przeprowadzono na odcinkach 4. M przy użyciu zestawu MOM z Vector Laboratories. Królicze przeciwciało poliklonalne PML (Santa Cruz Biotechnology Inc.) zastosowano w rozcieńczeniu 1: 500; mysie mAb Pml (MAB3738; Chemicon) zastosowano w rozcieńczeniu 1: 500. Wykrywanie IHC przeprowadzono za pomocą zestawu ABC Kit z Vector Laboratories. Wszystkie sekcje IHC zostały ocenione przez AL Richardsona, a diagnoza histologiczna była oparta na ustalonych kryteriach. FAO. Komórki inkubowano przez noc w pożywce hodowlanej zawierającej 100 | jM palmitynianu (C16: 0) i mM karnityny. W ciągu ostatnich 2 godzin inkubacji komórki poddawano pulsacji przez 2 godziny 1,7 Ci [9,10 (n) -3H] kwasu palmitynowego (GE Healthcare) w obecności lub nieobecności etomoksiru (100 .M, Sigma-Aldrich). i pożywkę zebrano w celu analizy uwolnionego 3H2O powstałego podczas komórkowego utleniania [3H] palmitynianu (39, 81). W skrócie, pożywkę wytrącano TCA, a supernatanty zobojętniano NaOH i ładowano na kolumny jonowymienne wypełnione żywicą DOWEX 1X2-400 (Sigma-Aldrich). Radioaktywny produkt eluowano wodą i oznaczono ilościowo za pomocą zliczania scyntylacyjnego płynu. Utlenianie palmitynianu [3H] normalizowano do zawartości białka przy użyciu testu białek DC z białkiem Rad. Etomoksir, specyficzny inhibitor CPT1a, został użyty do swoistego hamowania mitochondrialnego FAO. W komórkach MCF10A zmierzono FAO jak opisano wcześniej (10). Statystyka. Istotność statystyczną oceniano stosując test t-Studenta 2-tailed, o ile nie podano inaczej. Wartość AP mniejsza niż 0,05 została uznana za statystycznie istotną. Zatwierdzenie badania. Protokół dotyczący zwierząt został sprawdzony i zatwierdzony przez Komitet ds. Opieki i Użytku Zwierząt Beth Israel Deaconess Medical Center Institute (IACUC). Analiza próbek ludzkich była zgodna z wszelkimi wymogami etycznymi i została zatwierdzona przez Institutional Review Board Dana-Farber / Harvard Cancer Centre (protokół bankowości tkanek 93-085). Dodatkowe materiały Zobacz dodatkowe dane Podziękowania Podziękowania dla P. Hemmerich i I. Kitabayashi za udostępnienie cennych odczynników. Dziękujemy wszystkim członkom laboratorium Pandolfi, w szczególności RM Hobbs, D. Sciaranghella, MS Song i L. Salmena oraz J. Brugge, A. Grassianowi i M. Serrano za radę i wsparcie techniczne. Praca ta była wspierana przez granty NIH dla PP Pandolfi i częściowo wspierane przez NCI Harvard SPORE w raku piersi (2P50 CA089393) i Breast Cancer Research Foundation (do AL Richardson). Prace A. Carracedo były wspierane przez EMBO, nagrodę Ramón y Cajal (hiszpańskie Ministerstwo Edukacji), ISCIII (PI10 / 01484), grant Marie Curie IRG (277043) oraz Baskijski rząd edukacji (PI2012-03 ). Przypisy Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J Clin Invest. 2012; 122 (9): 3088. 3100. doi: 10.1172 / JCI62129.
[podobne: alergolog kłodzko, kaszel krtaniowy u dziecka, syndrom helsiński ]

0 thoughts on “pawlukiewicz rzeszów”