Skip to content

operacja przepukliny pachwinowej wrocław

4 miesiące ago

182 words

Babka ze strony matki, dziadek ze strony ojca, oboje rodzice i nienaruszone dziecko byli heterozygotyczni (ryc. 1B). Znany efekt założyciela prawdopodobnie wyjaśnia, dlaczego dwie niezwiązane rodziny z subdopulacji żydowskiej aszkenazyjskiej niosą tak rzadką mutację (17). Przewidywanym wynikiem mutacji jest pominięcie egzonu 8 (18), co daje usunięcie w ramce 75 pz (ryc. 1C). Stosując RT-PCR ze starterami flankującymi ekson 8 (Figura 1D), potwierdziliśmy produkty cDNA odpowiadające allelowi delecyjnemu typu dzikiego i egzon 8 (8 (8) u rodziców i nie dotkniętego chorobą dziecka, przy czym tylko mutant u chorego dziecka ( Figura 1D). Nie wykryto żadnych innych produktów specyficznych dla genu. Eliminacja Exon 8 usuwa 25 aminokwasów z wysoce konserwatywnej domeny MBOAT DGAT1, ale nie wpływa na domniemane reszty miejsca aktywnego (odnośnik 19 i Figura 1E). Aby określić wpływ mutacji na aktywność DGAT1, eksprymowaliśmy pełnej długości i cDNA (8 FLAG) (znakowane FLAG i nieznakowane) w mysich embrionalnych fibroblastach (MEF) pozbawionych Dgat1 (20) (DGF-DGO MEF). Chociaż obecne były oba gatunki mRNA, nie wykryto ani białka DGAT1, ani aktywności DGAT1 in vitro w komórkach wyrażających cDNA p <8 (Figura 2A). Ekspresjonowaliśmy również konstrukty w MEF pozbawionych zarówno DGAT1, jak i DGAT2 (DGF-DGO-ME ME) (20). DGF-1,2-KO MEF eksprymujące DGAT1 typu dzikiego i inkubowane z TG zakumulowanymi za pomocą [14C], ale komórki wykazujące ekspresję a 8 nie (Figura 2B). Wyniki te wskazują, że białko DGAT1 i aktywność są tracone z mutacją A 8. Figura zmutowanego allela o p. 8 daje niestabilne białko, powodując utratę aktywności DGAT1. CDNA DGAT1 ulegały ekspresji w MEF DGAT1-KO lub DGAT1,2-KO. (A) aktywność DGAT1 (akumulacja [14C] -TG) była nieobecna w lizatach z komórek wyrażających a 8, pomimo obecności mRNA. Wszystkie lizaty syntetyzowały [14C] -diacyloglicerol ([14C] -DAG) (kontrola wewnętrzna). (B) Nienaruszone komórki z ekspresją 8 nie kumulują TG, jak zmierzono za pomocą chromatografii cienkowarstwowej w liniach komórkowych DGAT1,2-KO po inkubacji z kwasem oleinowym (200 mM). Wolny cholesterol (FC) zastosowano jako kontrolę obciążenia. (C) Immunoblot pokazujący, że hamowanie proteasomu (MG132) ratuje ekspresję białka. 8 w MEF DGAT1,2-KO. (D) Eksprymowane przez MG132 DGAT1,2-KO MEF wyrażające a8 nie kumulują [14C] -TG po 2-godzinnym traktowaniu 200 mM kwasem [14C] -oleinowym. (E) qPCR pokazujące, że ludziom brakuje ekspresji DGAT2 w jelicie cienkim. Akt., Działalność; Duo., Dwunastnica; Jeju., Jejunum; Ile., Ileum. W celu ustalenia, czy białko A 8 ulega szybkiej degradacji, użyliśmy MG132 do hamowania degradacji proteasomalnej i rzeczywiście odkryliśmy, że białko A8 wykryto po 4 godzinach (Figura 2C). Niemniej jednak, komórki DGAT1,2-KO traktowane TG132 zakumulowały TG tylko podczas ekspresji DGAT1 typu dzikiego, ale nie. 8 (Figura 2D) [hasła pokrewne: hitaxa opinie, guzek na podniebieniu, kaszel krtaniowy u dziecka ]

0 thoughts on “operacja przepukliny pachwinowej wrocław”