Skip to content

laryngolog od uszu

3 miesiące ago

547 words

Wartość P w C wskazuje na znaczenie testu dokładnego Fishera. Zielone i czerwone kolory w D reprezentują, odpowiednio, regulowane w dół i podwyższone geny, podczas gdy lewy boczny słupek przedstawia stan tych genów w PML-KO w porównaniu do mikromacierzy z ekstraktem wątrobowym WT (zielony, obniżony w PML-KO; czerwony, zwiększony w PML -KO). W celu dalszego zbadania istnienia zmiany sygnalizowania PPAR u myszy Pml-KO, wykorzystaliśmy publicznie dostępne dane ekspresji genów (GEO GSE8295) (32). W tym badaniu myszy Ppara-WT i -KO traktowano agonistą PPARA, Wy-14643, w celu określenia genów, które są pod kontrolą transkrypcyjną tego receptora jądrowego (32). Najpierw porównaliśmy transkrypty różnicowo wyrażane pomiędzy PML-WT i -KO z tymi znalezionymi w Ppara-WT w porównaniu do -KO. W tym celu wygenerowaliśmy diagram Venna i znaleźliśmy 37 połączonych rdzeniem genów (29% genów o różnej ekspresji w Pml-WT w porównaniu z -KO, dokładny test Fishera, P = 3,3 x 10 16, Figura 2C). Skondensowane geny przedstawiono na fig. 2D, gdzie wskazano stan tych genów w wątrobie PML-KO (walidacja ekspresji genów w suple- mentalnej figurze 2A). Ponadto, Analiza Wzbogacenia Zestawu Gene (GSEA) zidentyfikowała znaczące wzbogacenie genu o obniżonej ekspresji PML-KO (Figura 2E) w zestawie genu Ppara-KO w porównaniu z WT-WT. Następnie sprawdziliśmy in vitro wpływ obecności lub nieobecności PML w funkcji PPAR. Z jednej strony ocenialiśmy wpływ PML na aktywność PPAR-ów przy użyciu ugruntowanego celu PPAR, PDK4 (33,34). Zgodnie z naszymi obserwacjami indukcja Pdk4 po ekspozycji na palmitynian i karnitynę (warunki, w których przeprowadza się oznaczenie FAO) była znacząco zmniejszona w pierwotnych i transformowanych MEF typu PML-KO (Figura 3A i Suplementowa Figura 2B). Co ważne, selektywni agoniści PPARA i PPARD (odpowiednio Wy-14643 i L165-041) wykazywali zmniejszoną skuteczność indukowania Pdk4 w MEF Pml-KO (Figura 3A). Z drugiej strony, ocenialiśmy wpływ PML na aktywność transkrypcyjną PPAR przez testy reporterowe lucyferazy, co wskazywało, że PML moduluje aktywność transkrypcyjną receptora jądrowego PPAR (Figura 3B i Suplementowa Figura 2C). Figura 3PML reguluje sygnalizację PPAR i acetylację PGC1A. (A) Analiza PCR w czasie rzeczywistym Pdk4 w transformowanych MEF (Ras-E1A) potraktowanych przez noc palmitynianem i karnityną (P + C) (odpowiednio 100 (im i mM, n = 7), Wy14643 (100. M, n = 3) i L165041 (10 (M, n = 4) z zastosowaniem glukuronidazy B jako kontroli endogennej. Paski błędów reprezentują średnią. SEM. Wartość P wskazuje na istotność statystyczną w teście. (B) Aktywność reportera lucyferazy PPAR w komórkach HEK293 transfekowanych wektorem pLNCX lub pLNCX-PMLIV po traktowaniu nośnikiem lub Wy14643 (50 .M) (n = 3). Paski błędów wskazują na średnią. SD. (C) Western Blot do wykrywania acetylacji PGC1A w immunoprecypitatach PGC1A z komórek U2OS transfekowanych wektorami eksprymującymi PMLIV lub bez (n = 4); prawy panel pokazuje kwantyfikację z 4 niezależnych eksperymentów. Paski błędów wskazują na średnią. SD. (D) Western blot do wykrywania acetylacji PGC1A w immunoprecypitatach PGC1A z komórek U2OS transfekowanych wektorami wyrażającymi puste lub PMLIV i traktowanych zaróbką lub inhibitorem SIRT1 EX527 (10 (M, 24 godziny). PML jest podstawowym składnikiem PML-NB (7), który jest gospodarzem ponad 70 białek i reguluje różne procesy modyfikacji potranslacyjnej białka, w tym ubikwitynację, SUMOilację i acetylację (5, 9, 35)
[więcej w: czy sepsa jest zaraźliwa, lux medica szczecin, szczypiący język ]

0 thoughts on “laryngolog od uszu”