Skip to content

boli mnie trzustka po jedzeniu

2 miesiące ago

115 words

(A) Cytokiny w BAL zainfekowanych myszy leczonych PAR1-AP lub nie mierzono testem ELISA 24, 48 i 72 godziny po inokulacji. Dane są średnie. SD od 5. 11 pojedynczych zwierząt na grupę z 3 eksperymentów. (B) Względne liczby PMN w BAL od zainfekowanych myszy leczonych PAR1-AP lub nie. Procent PMN określono przez barwienie May-Grünwald. Giemsa 24, 48 lub 72 godziny po inokulacji. Wyniki są średnie. SD od 4. 5 pojedynczych myszy na grupę z 2 indywidualnych doświadczeń. Nie infekowane myszy zastosowano jako kontrolę (n = 2. 4 na grupę). (C) Miana wirusa H1N1 w płucach we wskazanym czasie po zakażeniu myszy leczonych lub nie zawierających 50 .M PAR1-AP. Dane są średnie. SD od 3. 5 pojedynczych zwierząt na grupę. * P <0,05, leczone vs. nietraktowane, test Manna-Whitneya. Replikacja wirusa w płucach. Następnie zbadaliśmy, czy wpływ aktywacji PAR1 na wynik infekcji IAV u myszy koreluje ze wzrostem produkcji wirusa w płucach. W tym celu określano miana zakaźnych wirusów w płucach pobranych od myszy traktowanych PAR1-AP (50 .M) lub peptydem kontrolnym w różnych punktach czasowych po inokulacji. W 24 i 48 godzin po inokulacji, praktycznie nie wykryto replikacji wirusa (101 stanowiło granicę wykrywalności testu), ale miana wirusa płuc znacząco wzrosły po traktowaniu PAR1-AP (Figura 2C). Nie zaobserwowano znaczących różnic 3 i 5 dni po zakażeniu. Dane te sugerują, że aktywacja PAR1 sprzyja wczesnemu wzrostowi produkcji wirusa w płucach myszy. Wpływ aktywacji PAR1 na produkcję wirusa, spadek masy ciała i przeżycie po zakażeniu IAV zależy od PLG. Aby odszyfrować mechanizm, w którym PAR1 przyspiesza wytwarzanie wirusa in vivo, przeprowadziliśmy eksperymenty in vitro w celu oceny wpływu aktywacji PAR1 na replikację wirusa w komórkach nabłonka pęcherzyków A549. PAR1-AP wyzwala fosforylację ERK w tych komórkach, z maksymalnym efektem około 40 .m (Figura 3A); to stężenie zastosowano we wszystkich kolejnych eksperymentach in vitro. Ponieważ rozszczepienie proteolityczne HA jest kluczowe dla infekcyjności IAV, a PLG promuje replikację IAV przez cięcie HA (23, 24), badaliśmy wpływ dodania PLG. samodzielnie lub w połączeniu z PAR1-AP. na temat produkcji wirusów. Zgodnie z oczekiwaniami, produkcja wirusa była ledwo wykrywalna w nietraktowanych hodowlach A549, ale została znacznie zwiększona przez dodanie PLG (Figura 3B). Co ważne, dodanie PAR1-AP zwiększyło ten efekt 8 i 24 godziny po infekcji. Efektu PAR1-AP nie obserwowano, gdy trypsynę stosowano jako alternatywną proteazę do replikacji IAV (danych nie pokazano), a sygnalizacja PAR1 nie wpływała na wchodzenie wirusa do komórek (dodatkowa Figura 2). Jednakże włączenie PAR1-AP wydawało się zwiększać zależne od PLG cięcie HA. Zatem, następnie zakażono komórki A549 (MOI 0,5) w obecności lub nieobecności PLG, z lub bez PAR1-AP, i oceniano cięcie DNA przez analizę Western blot 16 godzin po zakażeniu. W przypadku braku PLG, podobne ilości nieodłamanego HA (HA0) gromadziły się w zakażonych komórkach, a PAR1-AP był bezskuteczny (Figura 3C). W obecności PLG, oprócz HA0, obserwowano pasmo 25 kDa odpowiadające HA2. Co ważne, w hodowlach traktowanych PAR1-AP3 intensywność HA2 wzrosła, a HA0 zmniejszył się w porównaniu z hodowlami kontrolnymi. Tak więc, wirusowy HA został rozszczepiony w sposób zależny od PLG, który został wzmocniony przez PAR1-AP i skorelowany ze zwiększoną produkcją wirusa. Ryc. 3 Wpływ niedoboru PLG i PLG na produkcję IAV i efekty PAR1-AP. (A) fosforylacja ERK po stymulacji komórek A549 wskazanymi stężeniami PAR1-AP. Zastosowano przeciwciała anty-fosfo-Erk i anty-Erk. (B) Miana zakaźnych wirusów w supernatancie zainfekowanych komórek po stymulacji 40 .M PAR1-AP lub peptydem kontrolnym w obecności lub nieobecności PLG [więcej w: bielactwo wrodzone, tabletka wczesnoporonna bez recepty, alergolog kłodzko ]

0 thoughts on “boli mnie trzustka po jedzeniu”